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                    • 技術文章ARTICLE

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                      研域小課堂:關于細胞傳代方法您做對了嗎?

                      發布時間: 2019-09-05  點擊次數: 1583次

                      經過自主研發和兼并重組不斷擴展企業產品線,逐步發展為試劑的專業制造商和電子商務集成供應商,成為試劑職業發展的者。在開始細胞傳代前,仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全。

                      一:細胞與試劑方面:

                      1、細胞(單層細胞,鏡檢合適)

                      2、培養液(MEM-0.2%LH 培養液或MEM 培養液或199 等合適細胞有要求的培養液)

                      3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1 萬單位)

                      4、7.5%NaHC03 溶液
                      ?
                      5、0.25%胰蛋白酶

                      6、 PBS 洗液。

                      二;試驗小用具方面:

                      1、小方瓶(100m1)

                      2、克氏瓶

                      3、膠塞

                      4、吸管(10ml、1m1)

                      5、細胞吹打管(20 ml)(以上用具需經121℃至少15 分鐘高壓滅菌)

                      6、C02 孵箱

                      7、超凈臺

                      8、倒置顯微鏡

                      9、4℃、- 20℃冰箱
                       
                      三:細胞傳代的操作過程

                      1、挑選細胞:鏡檢細胞,挑選成長狀態杰出,細胞界限清晰,具有立體感,形狀好無污染、無反常及可疑病變細胞。

                      2、制造細胞培養液:按以下配比制造MEM-0.2%LH 培養液100ml 內,參加滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。

                      3、消化細胞:先用PBS 洗液沖刷細胞外表1-2 次,每次10m1,棄去洗液,向細胞瓶內參加0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細胞瓶平放,使消化液*覆蓋細胞外表。

                      4、至細胞*脫落到胰酶中:每瓶參加10m1 細胞培養液吹打渙散細胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再參加10m1 細胞培養液重復吹打一次后分裝,然后補加至所需培養量。

                      5、加塞,置于37±1℃孵箱培養。約2~4 天成片(由細胞接種濃度決定)。

                      6、填寫傳代記錄。

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