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                      研域干貨:植物安排樣本的前處理

                      發布時間: 2019-10-29  點擊次數: 1375次

                      一、勻漿介質 

                       

                      一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據樣本及測定目標的情況自行設定濃度,意圖是堅持樣本的等滲環境。 

                       

                      二、安排勻漿的制備 

                       

                      1、取安排塊(0.2g~0.5g)可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,濾紙拭干,稱重,放入5ml的勻漿管中。 

                       

                      2、按重量(g):體積(ml)=1:4的比例參加4倍體積的勻漿介質于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎安排塊。 

                       

                      3、勻漿的方式:手藝勻漿,機器勻漿。 

                       

                      ① 手藝勻漿:左手持勻漿管將下端刺進盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直刺進套管中,上下轉動研磨數十次(6~8分鐘),充沛研碎,制成20%的勻漿液。 

                       

                      ② 機器勻漿:用安排搗碎機10000~15000 轉/分 上下研磨制成20%安排勻漿,也可用內切式安排勻漿機制備(勻漿時刻10秒/次,間隙30秒,接連3~5次,在冰水中進行,可適當延伸勻漿時刻),
                       

                      4、將制備好的20%勻漿液用一般離心機或低溫低速離心機4000轉/分左右,離心10~15分鐘,取上清液進行測定. 

                       

                      三、樣本保存: 

                       

                      植物安排樣本暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中心如不重復凍融,-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月。 制備好的勻漿液建議不要凍存,當天進行測定,如放置時刻過長相關酶活會有所下降,部分目標4℃可寄存3~5天(如SOD要寄存2~3天,MDA可寄存3~5,總蛋白測定可存5~7天。

                       

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